科研人速来！核酸提取样本保存指南请查收！2023-05-09 14:25点击次数：8227
关键词核酸提取样本保存医疗样本植物质粒血液一天的提取实验吭呲吭呲做完了。
实验试剂，操作步骤，实验仪器，每一步复核下来，完美！
可是，为什么提出来的核酸得率低，纯度低，降解多呢？
难道今日黄历诸事不宜？
到底是哪里出了问题？
其实有时候我们在取样和保存样本的时候，一些细节问题没注意到，那么就会导致整个提取实验失败。
一顿操作猛如虎，一看结果“我命苦”！
下面，我们就细细分析核酸提取中的样本保存建议，样本保存好，提取实验如有神助！
1. 医疗样本的保存
基因相关性疾病的检测分析是医疗样本研究的主要内容之一，其中涉及的样本纷繁复杂，统称为医疗样本，包括组织、抗凝血，干血斑、血凝块、白膜层、血清/血浆、拭子、羊水、漱口水、毛囊、FFPE等多种样本。
在临床样本检测分析中，样本的质量保证是非常重要的一步，是确保结果可靠性的重要环节。基于分子生物学的医疗样本检测，样本的保存及适当的预处理对核酸样本的提取具有决定的意义。
血液样本保存：
1）抗凝血：如用于基因组DNA提取，保存一周的样本，置于4℃冰箱内保存，保存一个月的样本，置于-20℃冰箱内保存，保存3个月以上的样本，置于-70℃冰箱内保存。保存过程中避免反复冻融。冻存后的血液提取DNA时，应在37℃速融，避免溶解过程中核酸发生降解。如用于RNA提取，应尽快先提取RNA，再做RNA保存。
2）血凝块：保存一个月的样本，置于-20℃冰箱内保存，保存更长时间的样本，置于-70℃冰箱内保存。保存过程中避免反复冻融。提取前，血液应在在37℃速融，轻柔颠倒混匀。
3）血清/血浆：全血样本需尽快分离血清/血浆样本，分离后保存一周的样本，置于4℃冰箱内保存，保存一个月的样本，置于-20℃冰箱内保存，保存3个月以上的样本，置于-70℃冰箱内保存。保存过程中避免反复冻融。
4）干血点滤纸片：室温保存及运输，如需长期储存，置于-70℃冰箱内保存。
组织样本保存：
1）新鲜组织：可在-70℃条件下长期保存，保存时间一般不超过3年。
2）石蜡包埋组织：FFPE样本最佳保存温度为4℃，建议保存不超过3年，时间过长易导致DNA完整性受损；如提取FFPE样本RNA，则样本保存时间一般不超过1年。石蜡样本经脱蜡后提取核酸。
体液样本保存：
1）脑脊液：样本采集后应立即送检，不超过1h；不可冷藏。临床怀疑脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌感染，样本应注意保温运送。若怀疑厌氧菌感染，可将脑脊液直接注入血厌氧培养瓶中，迅速送检。
2）胸水：样本采集后应立即送检，通常室温15min内应送至实验室，若不能及时送检，不可冷藏。室温保存不得超过24h。
3）腹水：样本采集后应立即送检，通常室温15min 内应送至实验室，若不能及时送检，不可冷藏。室温保存不得超过24h。腹水如需厌氧菌检测，使用样本采集管留取腹水，把试管放置在厌氧袋等无氧条件下迅速送检；或将腹水直接注入厌氧血培养瓶中送检。
4）关节液：样本采集后应立即送检，通常室温15min内应送至实验室，若不能及时送检，不可冷藏。室温保存不得超过24h。
5）尿液：常规尿液样本留尿后应立即送检，不能立即送检的标本应放2℃～8℃冰箱或室温条件下保存，但不得超过2小时。
口腔拭子保存：
1）使用保存液保存，保存条件及保存时间视保存液而定。
2）如提取DNA，也可风干保存，干燥后置于-20℃冰箱中，可保存3个月。
粪便样本保存：
粪便采集后立即（运输时间不超过30min）放入-80℃冻存可维持粪便菌群的原始结构与组成长达6个月；在4°C保存条件下，储存24小时不会显著改变粪便微生物群落结构；或利用保存液做保存，保存条件及保存时间视保存液而定。保存过程中应避免反复冻融造成细胞破裂及不稳定菌种的损失。
2. 环境样本的保存
使用传统采样方法开展生态学研究，一些物种的样本采集通常比较困难，并且耗时费力。通过从土壤、水体或是空气中包含的动物毛发、脱落的细胞、粪便等进行非损伤性取样，从而进行遗传核酸检测，这个方法相比传统的直接采样，成本更低，样本采集受气候条件影响较小，可以进行更大数量的样本收集。关于环境样本核酸检测的发展为了解环境系统中生物多样性提供了一个独特的视角，可以同时检查多个营养水平和生命领域的生物，从而提供有关与生态系统变化相关的复杂生物相互作用的关键信息。
目前，在生态学研究中环境DNA样本的主要来源是水体、土壤和粪便等。环境样本核酸含量偏低，杂质多，不易去除，容易抑制下游实验，得率低。如果样本保存不当，那么在原本的提取难度上无疑是“雪上加霜”。
土壤样本的保存：
若在样本采集现场无法实现对样本中杂物的去除工作，回到实验室后，尽快将土壤样品中的石头、植物根系、虫子等剔除，然后将土样放入-80℃冰箱中进行长期储存。如果实验室中没有-80℃的冰箱，可以将样品放到-20℃冰箱短期（1个月内）保存。在保存期间，避免反复冻融。
水体样本的保存：
1）选择合适的容器，避免二次污染或者变质；
2）大多数情况下，建议从采集样品后到运输到实验室期间，在 1～5℃冷藏并暗处保存。冷藏并不适用长期保存，对废水的保存时间更短。-20℃的冷冻温度一般能延长贮存期。分析挥发性物质不适用冷冻程序。如果样品包含细胞，细菌或微藻类，在冷冻过程中，会破裂、损失细胞组分，同样不适用冷冻。
3）添加化学试剂保存。
3.科研样本的保存
除了常见的医疗样本和环境样本，科研活动中对于植物DNA、细菌DNA、质粒DNA的研究也非常常见。植物的基因研究，除了能帮助人类了解植物间的种属关系之外，也能帮助研究人类在植物遗传方面带来无限的可能和突破性的发展。对细菌基因组等微生物的研究，主要是基于微生物在医学、环境等方面的重要价值，比如微生物与宿主互作相关的疾病检测、药物研发、农作物品质、植物抗逆等；医学、食品等方面的抗菌材料研发；生物能源；环境保护相关的污染治理、废物利用等。
植物样本的保存：
取得待测植物样品后，用蒸馏水把泥土漂洗干净，用滤纸把多余水分吸取干净，分装成合适大小于-80℃或者液氮中保存。
细菌样本的保存：
1） 细菌培养完成后，10000rpm离心5min收集细菌，加入PBS吹打，10000rpm离心5min，弃去上清；
2） 反复3次，弃去上清后于-80℃或者液氮冻存待用。
注意：
（1）提取核酸的样品应尽量采用新鲜样品，冻存样品提取的核酸可能会得率降低；
（2）样本保存在-80℃或液氮也要避免反复冻融，建议尽快提取；
（3）长距离运送样品时采用干冰或者液氮。
收藏这份保存指南，样本保存好，一顿操作流如水，实验结果猛如虎。
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